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蒲公英提取物檢測方法

管理員來源于網絡24402020-03-12 20:06
1.供試品溶液的制備:取蒲公英提取物1 g,加甲醇20 ml,加熱回流30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水10 ml使溶解,濾過,濾液用醋酸乙酯振搖提取2次,10 ml/次,合并醋酸乙酯液,蒸干,殘渣加甲醇1 ml使溶解,作為供試品溶液。
2.對照品溶液的制備:取咖啡酸對照品,加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液。另取綠原酸對照品,加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。
3.薄層層析:吸取上述3種溶液各6 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢測。供試品色譜中,在與對照品相應位置上,顯相同顏色的熒光斑點。
▲含量測定:色譜柱Agilent Hypersil ODS柱(5μm,4.6mm×250mm);流動相為甲醇-磷酸鹽緩沖液(pH4.0):(23∶77),檢測波長323nm,柱溫25℃,流速為1.0ml/min。靈敏度:1.0AUFS;理論塔板數按咖啡酸峰計算應不低于3000,咖啡酸峰與其他峰能達到基線分離,且出峰時間適宜,峰形較好。 1.對照品溶液的制備:分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對照品各2.5 mg,置50 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,精密量取5ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得0.025 mg/ml的對照品溶液。 2.供試品溶液的制備:取蒲公英提取物干粉0.5g,精密稱定,置100ml具塞錐形瓶中,精密加含5%甲酸的甲醇溶液50ml,密塞,搖勻,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)30min,取出,放冷,再稱定重量,用含5%甲酸的甲醇溶液補足減失的重量,搖勻,離心,取上清液,用微孔濾膜(0.22 μm)濾過,濾液置棕色量瓶中,即得。
3.線性關系考察:分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對照品各2.5mg,置50ml容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,再用甲醇逐級稀釋得0.05,0.025,0.0125,0.00625,0.003 125 mg/ml 5個不同濃度的對照品溶液,分別進樣10μl,測定其峰面積,然后分別以綠原酸和咖啡酸的濃度為橫坐標,5次測定峰面積的均值為縱坐標,繪制標準曲線,計算回歸方程為綠原酸:Y=3×107X-24923,R2=0.9995;咖啡酸:Y=5×107X+8 862.3, R2=0.999 9。實驗結果表明綠原酸和咖啡酸的濃度在0.003125~0.05 mg/ml范圍內均與所測得的相應峰面積呈良好的線性關系。

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